Relationship of short tandem repeats flanking leptin-melanocortin pathway genes with anthropometric profile and leptinemia in Brazilian individuals / Relação de short tandem repeats (STR) em genes envolvidos na via da leptina-melanocortina com o perfil antropométrico e a leptinemia em brasileiros

OBJECTIVE: To investigate the relationship of short tandem repeats (STR) near genes involved in the leptin-melanocortin pathway with body mass index (BMI) and leptinemia. SUBJECTS AND METHODS: Anthropometric variables and leptinemia were measured in 100 obese and 110 nonobese individuals. D1S200, D2S1788, DS11912, and D18S858 loci were analyzed by PCR and high-resolution electrophoresis. RESULTS: Overall STR allele frequencies were similar between the obese and non-obese group (p > 0.05). Individual alleles D1S200 (17), D11S912 (43), D18S858 (11/12) were associated with obesity (p < 0.05). Individuals carrying these alleles showed higher BMI than non-carriers (p < 0.05). Moreover, a relationship between D18S858 11/12 alleles and increased waist circumference was found (p = 0.040). On the other hand, leptinemia was not influenced by the studied STRs (p > 0.05). CONCLUSIONS: D1S200, D11S912, and D18S858 loci are associated with increased BMI and risk for obesity in this sample.

OBJETIVO: Investigar a relação de short tandem repeats (STR) em genes envolvidos na via da leptina-melanocortina com índice de massa corporal (IMC) e leptinemia. SUJEITOS E MÉTODOS: Variáveis antropométricas e leptinemia foram medidas em 100 indivíduos obesos e 110 não obesos. Os loci D1S200, D2S1788, DS11912 e D18S858 foram analisados por PCR e eletroforese de alta resolução. RESULTADOS: As frequências globais dos alelos da STR foram similares entre os grupos obeso e não obeso (p > 0,05). Alelos individuais de D1S200 (17), D11S912 (43), D18S858 (11/12) foram associados com obesidade (p < 0,05). Indivíduos portadores desses alelos apresentaram valores de IMC maiores que os dos não portadores (p < 0,05). Além disso, a presença dos alelos D18S858 11/12 foi relacionada com circunferência abdominal elevada (p = 0,040). Por outro lado, a leptinemia não foi influenciada pelos STRs estudados (p > 0,05). CONCLUSÕES: Os loci D1S200, D11S912 e D18S858 são associados com IMC aumentado e risco de obesidade nesta amostra populacional.

Relationship between variants of the leptin gene and obesity and metabolic biomarkers in Brazilian individuals / Associação entre variantes do gene de leptina e obesidade e biomarcadores metabólicos em indivíduos brasileiros

OBJECTIVE: The relationship between variants of the leptin gene (LEP) and obesity and metabolic biomarkers was investigated in Brazilian individuals. SUBJECTS AND METHODS: One-hundred-ten obese (BMI > 30 kg/m²) and 100 non-obese individuals (145 women and 65 men, aged 49 ± 14 years) were randomly selected. Plasma leptin, glycemia, serum lipid measurements and LEP -2548G>A and 3'HVR polymorphisms were analyzed. RESULTS: The LEP -2548GG genotype was associated with a 2.2 percent and 2.0 percent increase in BMI (p = 0.009) and plasma leptin (p = 0.031), respectively. 3'HVR I/II (classes I/I+I/II) genotypes contributed with 1.8 percent of BMI values (p = 0.046). LEP I/G combined genotypes (I/IGG, I/IGA and I/IIGG) were associated with obesity, and increased BMI, waist circumference, leptin and triglycerides (p < 0.05). These relationships were found in women (p < 0.05) but not in men. LEP I/G combined genotypes were not associated with hypertension, hyperglycemia, dyslipidemia and coronary artery disease. CONCLUSIONS: LEP I/G combined genotypes are associated with obesity-related metabolic biomarkers and phenotype in a gender-dependent manner.

OBJETIVO: A relação entre as variantes do gene da leptina (LEP) e obesidade e biomarcadores metabólicos foi investigada em indivíduos brasileiros. SUJEITOS E MÉTOODS: Cento e dez indivíduos obesos (IMC > 30 kg/m²) e 100 não obesos (145 mulheres e 65 homens, idade 49 ± 14 anos) foram selecionados aleatoriamente. Leptina plasmática, glicemia, lípides séricos e polimorfismos LEP -2548G>A e 3'HVR foram analisados. RESULTADOS: O genótipo -2548GG foi associado com aumento de 2,2 por cento e 2,0 por cento no IMC (p = 0,009) e leptina plasmática (p = 0,031), respectivamente, enquanto os genótipos 3´HVR I/II (classes I/I+I/II) contribuíram com 1,8 por cento dos valores de IMC (p = 0,046). Os genótipos combinados LEP I/G (I/IGG, I/IGA e I/IIGG) foram associados com obesidade e IMC aumentado, circunferência abdominal, leptina e triglicérides aumentados (p < 0,05). Essas relações foram encontradas em mulheres (p < 0,05), mas não em homens. Os genótipos LEP I/G combinados não foram associados com hipertensão, hiperglicemia, dislipidemia e doença arterial coronariana. CONCLUSÕES: Genótipos combinados LEP I/G são associados com biomarcadores metabólicos e fenótipo de obesidade de forma gênero-dependente.

Leptin G-2548A promoter polymorphism is associated with increased plasma leptin and BMI in Brazilian women / Polimorfismo do promotor do gene da leptina está associado ao aumento de leptina plasmática e IMC em mulheres brasileiras

Variants in leptin gene (LEP) have been implicated in the pathogenesis of obesity. The relationship between LEP G-2548A polymorphism and obesity-related traits was evaluated in a sample of Brazilian women (n = 228) who were randomly selected from two clinical centers in Sao Paulo city. Blood samples were collected for DNA extraction, plasma leptin and serum lipids measurements. LEP G-2548A genotypes were identified by a PCR- RFLP strategy using the endonuclease Alw44I. LEP G-2548A was associated with obesity after adjustment for covariates (age, hypertension, coronary artery disease, smoking and physical activity). Women carrying G allele had a four times higher risk of obesity than the A allele carriers (OR: 4.11, CI95 percent: 1.06-15.90, p = 0.041). G allele was also related to increased plasma leptin (p = 0.024) and body mass index (p = 0.027). Hypertension, hyperglycemia, dyslipidemia and coronary artery disease were associated with obesity. However LEP G-2548A polymorphism was not related to these variables. All together these data suggest that LEP G-2548A polymorphism has an important role in regulating plasma leptin levels and body mass index in women.

Variantes no gene da leptina (LEP) foram implicados na patogênese da obesidade. A relação entre o polimorfismo LEP G-2548A e as características relacionadas com a obesidade foram avaliadas em mulheres brasileiras (n = 228), que foram selecionadas randomicamente de dois centros de pesquisa clínica na cidade de São Paulo. As amostras de sangue foram coletadas para extração de DNA e determinações de leptina plasmática e lipídeos séricos. Os genótipos do LEP G-2548A foram identificados pela estratégia de PCR-RFLP, empregando a endonuclease Alw44I. O polimorfismo LEP G-2548A foi associado com obesidade, após ajuste para as covariáveis: idade, hipertensão, doença arterial coronariana, tabagismo e atividade física. Mulheres com alelo G tiveram quatro vezes maior risco de obesidade que as portadoras do alelo A (OR: 4,11, CI95 por cento: 1,06-15,90; p = 0,041). O alelo G também foi relacionado com leptina plasmática (p = 0,024) e o índice de massa corporal (p = 0,027) aumentado. A hipertensão, a hiperglicemia, a dislipidemia e a doença arterial coronariana foram associadas com obesidade. Entretanto, o polimorfismo LEP G-2548A não foi relacionado com essas variáveis. Os resultados deste estudo são sugestivos de que o polimorfismo LEP G-2548A tem papel importante na regulação da leptina plasmática e no índice de massa corporal em mulheres.

Micrométodo para extraçäo de DNA genômico útil no diagnóstico molecular da Hipercolesterolemia Familial / A micromethod for DNA extraction useful in the molecular diagnostic of Familial Hypercholesterolemia

Os métodos para para extraçäo de DNA empregados hoje em dia na rotina laboratorial, utilizam grandes volumes de sangue, o que constitui um problema quando se usam amostras pediátricas. Outros métodos envolvem várias etapas, näo sendo adequadas para rotina laboratorial. No presente trabalho, foi desenvolvido um mátodo rápido de extraçäo de DNA de sangue total para pequenos volumes de amostra. Brevemente, volumes iguais de sangue total e NaI a 6M foram misturados. A seguir, as proteínas e debris celulares foram removidas por adiçäo de uma mistura de clorofórmio/álcool isoamílico (24:1). O DNA foi isolado da fase aquosa e purificado com isopropanol. Amostras de DNA foram também extraídas pelo método de precipitaçäo salina, previamente desenvolvido em nosso laboratório. A quantificaçäo e a pureza do DNA foram realizadas por espectrofotometria em 260 e 280 nm, sendo a sua integridade verificada por eletroforese em gel de agarose a 1 porcento. A quantidade de DNA de sangue total obtida pelo método proposto foi 1,5 vezes superior à obtida pela técnica de precipitaçäo salina (28,6 ñ 7,8 vs. 19,1 ñ 3,5µg/ml de sangue, respectivamente; p=0,0003). A pureza do DNA foi também superior (A subscrito 260/280=1,73ñ0,18 vs. 1,61ñ0,06, respectivamente; p=0,0164). Utilizando o DNA extraído pelo micrométodo, obtivemos sucesso na triagem de alteraçöes genéticas no receptor da LDL e na apolipoproteína B em pacientes com Hipercolesterolemia Familial (HF). Em resumo, o procedimento de extraçäo de DNA é simples, rápido e aplicável para obtençäo de DNA genômico de alta qualidade em 30 minutos, sendo portanto, útil no diagnóstico molecular da HF